Tri :
Date
Titre
Auteur
|
|
Nutrition et pathologies métaboliques
/ 07-06-2018
Lemaire Marion
Voir le résumé
Voir le résumé
La nutrition postnatale précoce conditionne la santé du futur adulte du fait de son rôle déterminant dans l’implantation du microbiote intestinal et le développement de la physiologie de l’hôte. L’objectif de mon travail de thèse a été d’évaluer les conséquences de la réintroduction de matière grasse laitière associée ou non au probiotique Lactobacillus fermentum dans des préparations pour nourrissons, sur le microbiote, la physiologie intestinale et le métabolisme de l’adulte, en utilisant le miniporc Yucatan comme modèle de l’Homme. Nos travaux ont montré un renforcement des défenses non spécifiques intestinales chez le jeune et une amélioration des fonctions endocrine et immunitaire intestinales de l’adulte soumis à un régime hyper-énergétique, réduisant ainsi le risque de développer une inflammation et des désordres métaboliques. Ces effets ont été associés à une modification de la digestion des préparations chez le jeune et à une modulation de la composition et de l’activité métabolique du microbiote intestinal. Des effets spécifiques de la matière grasse laitière et de L. fermentum, et d’autres complémentaires, ont été observés, suggérant des mécanismes d’action différents. Les modifications induites par la composition des préparations pour nourrissons étaient site- et âge-spécifiques, le comportement du microbiote caecal se rapprochant du microbiote fécal. En conclusion, l’optimisation des préparations pour nourrissons pourrait passer par l’ajout de matière grasse laitière et du probiotique L. fermentum.
|
|
Biochimie, biologie moléculaire et cellulaire
/ 14-06-2019
Merdrignac Aude
Voir le résumé
Voir le résumé
Le cholangiocarcinome intra hépatique (CCI) est une tumeur hépatique primitive développée aux dépens des canaux biliaires. Son pronostic est mauvais avec les traitements actuels qui augmentent peu la survie des patients. Sa cancérogénèse est complexe impliquant de nombreuses voies de signalisation dont la voie TGFβ. L’hypothèse du projet est l’implication des ARN longs non-codants (ARNlnc) comme médiateurs de la voie TGFβ dans le développement du CCI. Les objectifs de notre travail étaient d’identifier des ARNlnc régulés par le TGFβ et potentiels biomarqueurs diagnostiques ou pronostiques. Nous avons identifié une signature transcriptomique spécifique du TGFβ après stimulation de lignées cellulaires de CCI. Parmi les nouveaux gènes cibles, plusieurs ARNlnc ont été identifiés dont CASC15 renommé TLINC pour TGFβ-induced long intergenic non-coding RNA. TLINC aurait un rôle dans le remodelage du microenvironnement impliqué dans la cancérogénèse du CCI notamment par la régulation de l’IL8. Ce rôle pourrait s’exercer par l’interaction avec d’autres ARNlnc déjà identifiés dans le CCI e.g. NEAT1. TLINC est surexprimé dans les tumeurs humaines de CCI et pourrait constituer un biomarqueur diagnostique. Des isoformes circulaires de TLINC mises en évidence dans les tumeurs pourraient être détectables dans le sérum et constituer des biomarqueurs non invasifs. L’analyse transcriptomique d’une cohorte de patients divisée en 2 sous-groupes de pronostic différent a identifié une signature d’ARNlnc prédictive de la survie. L’ARNlnc ANRIL, déjà connu dans d’autres cancers, est un des ARNlnc qui pourrait constituer un biomarqueur pronostique.
|
|
Biologie cellulaire, biologie du développement
/ 03-12-2019
Metlej Perla
Voir le résumé
Voir le résumé
Notre laboratoire a établi et caractérisé la lignée d’hépatome humain HepaRG constituée de cellules progénitrices bipotentes capables de se différencier en hépatocytes et cholangiocytes, et d’une fraction de cellules souches cancéreuses (CSC-H). Ces cholangiocytes et CSC-H constituent de nouveaux modèles pertinents pour des études fondamentales et l’évaluation de nouvelles voies thérapeutiques ciblant ces cellules hépatiques. Les objectifs de mon projet étaient d’identifier des peptides ciblant les hépatocytes humains, les cholangiocytes et les CSCs par la technique de phage display et d’évaluer leur(s) effet(s) biologique(s). Par cette approche, nous avons identifié 1 peptide présentant une très forte liaison aux cholangiocytes et 3 peptides se fixant aux CSC-H. Le peptide 11 qui se fixe aux cholangiocytes présente une homologie partielle avec des protéines membranaires bactériennes. Nous avons établi un modèle d’infection de cholangiocytes par les bactéries de la souche Providencia Stuartii et montré que le peptide 11 inhibe l’internalisation de ces bactéries par ces cellules. D’autre part, les 3 peptides (Pep-55, 60,114) qui ciblent les CSC-H induisent des changements morphologiques lorsqu’ils sont ajoutés au milieu de culture des cellules HepaRG suggérant une activité biologique régulation la prolifération, la diffférenciation et/ou l’adhésion cellulaire. En conclusion, nous avons identifié des peptides nouveaux qui pourraient constituer des outils d’étude et de ciblage des cholangiocytes et des CSC-H.
|
|
Biologie et sciences de la santé
/ 21-12-2017
Peltier Lucas
Voir le résumé
Voir le résumé
Les surcharges en fer, qu’elles soient d’origine génétique ou secondaire, favorisent la baisse de densité minérale osseuse et par conséquent l’apparition d’une ostéoporose. Des liens entre surcharge en fer et perte osseuse ont pu être établis in vivo et in vitro, néanmoins les mécanismes mis en jeu, notamment sur la cellule ostéoblastique, restent incomplètement caractérisés. Notre objectif a donc été de préciser les mécanismes cellulaires conduisant à l’altération du phénotype et de l’activité ostéoblastique observée en présence d’un excès de fer. La réalisation préalable d’une étude transcriptomique sur la lignée ostéoblastique humaine MG-63 nous a permis d’identifier plusieurs gènes susceptibles de voir leur niveau d’ARNm régulé par le fer. Il a été fait l’hypothèse que ces différents gènes pouvaient être impliqués dans la survenue des pertes osseuses observées au cours des surcharges en fer. Ainsi l’expression du gène SPNS2, dont la protéine permet l’export de la Sphingosine-1-Phosphate (S1P), a été identifiée comme potentiellement induite par un excès de fer. Les relations entre l’expression du gène SPNS2 et un excès de fer ont ainsi été investiguées et les résultats obtenus ont mis en évidence une augmentation fer-dépendante de l’ARNm du gène SPNS2 dans la lignée MG-63, non retrouvée dans d’autres types cellulaires. Cette caractérisation nous a ainsi conduits à déterminer, dans la lignée MG-63, l’impact fonctionnel d’une exposition au fer sur l’export cellulaire de la S1P. Nous avons donc pour cela mis au point une méthode d’étude basée sur une stratégie « fluxomique » nous permettant d’évaluer l’efflux de la S1P au moyen d’un outil de spectrométrie de masse. Nos résultats objectivent une diminution des capacités de synthèse et d’export de la S1P en présence de fer et ceci malgré la surexpression du gène SPNS2. La diminution concomitante de l’expression du récepteur S1PR1 et du gène COL1A1 codant pour la chaîne α du collagène de type I suggère un impact fonctionnel de la baisse de concentration en S1P extracellulaire sur la cellule MG-63. La mise en évidence, dans un modèle ostéoblastique, d’une altération fer-dépendante de l’axe de signalisation S1P/S1PR ouvre de nouvelles perspectives quant à la compréhension des mécanismes mis en jeu lors des pertes osseuses associées aux surcharges en fer.
|
|
Nutrition et pathologies métaboliques
/ 02-03-2023
Penhoat Clémence
Voir le résumé
Voir le résumé
Les maladies hépatiques d’origine dysmétabolique représentent aujourd’hui un véritable enjeu de santé publique. Parmi elles, la stéatose (NAFL, Non Alcoholic Fatty Liver) est caractérisée par une accumulation excessive de lipides dans le foie et peut progressivement évoluer vers une stéatohépatite non alcoolique (NASH, non alcoholic steatohepatitis), qui est une lésion plus grave. Plusieurs études ont mis en évidence que le cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) a la particularité de générer des espèces réactives de l’oxygène (EROs) qui sont sources d’un stress oxydant propice à l’aggravation de la NAFL en NASH. Des travaux ont rapporté le rôle de certains acides gras parmi les facteurs métaboliques susceptibles d’activer le CYP2E1, en particulier dans un contexte d’obésité et/ou de NAFLD. Outre son rôle potentiel dans l’aggravation de la NAFL en NASH, le CYP2E1 est impliqué dans la toxicité hépatique du paracétamol, observée généralement après un surdosage (>10 g/j) intentionnel ou non, et plus rarement au cours de traitements à des doses pharmacologiques (3-4 g/j). Ainsi, le paracétamol pourrait être plus toxique dans un contexte de NAFLD et d’obésité. Notre travail a permis de montrer que tous les acides gras n’ont pas le même impact sur le CYP2E1 et sur la stéatose, dans le modèle cellulaire HepaRG. Dans nos conditions expérimentales, l’induction du CYP2E1 n’est pas non plus forcément corrélée à l’apparition d’une NAFL. Des investigations sur le métabolisme lipidique ont permis de comprendre les mécanismes sous-jacents au développement de cette NAFL. Notre étude a également permis d’identifier certains acides gras comme des facteurs de potentialisation de l’hépatotoxicité induite par le paracétamol, bien que les mécanismes sous-jacents ne soient pas encore totalement élucidés.
|
|
Toxicologie
/ 02-12-2022
Petitjean Kilian
Voir le résumé
Voir le résumé
L'utilisation intensive des pesticides génère une contamination des denrées alimentaires, une exposition de l’Homme à ces contaminants environnementaux et un problème de santé majeur. L'EFSA a établi pour chaque pesticide une dose journalière admissible (DJA), qui est un seuil de sécurité théorique pour la santé humaine. Néanmoins, la DJA ne tient pas compte des effets cumulatifs potentiels des cocktails de pesticides. Le premier objectif de cette étude était d'évaluer les effets d'un mélange de pesticides fréquemment retrouvé dans l'alimentation humaine (chlorpyriphos, diméthoate, iprodione, imazalil, diazinon, manèbe, mancozèbe) dans des modèles hépatocytaires in vitro. En utilisant des cellules HepaRG différenciées, nous avons mis en évidence un effet cytotoxique majeur du cocktail suite à une exposition unique à de faibles concentrations extrapolées à partir de la DJA. De plus, nous avons démontré que la toxicité de ce cocktail est portée par les dithiocarbamates (Mn-EBDC), le manèbe et le mancozèbe, qui contiennent du manganèse. Une exposition aiguë au cocktail, Mn-EBDC ou chlorure de manganèse (MnCl2) induit une surproduction d’espèces réactives de l’oxygène, qui a conduit à la mort cellulaire par apoptose. Nous avons également montré une surcharge intracellulaire/mitochondriale de manganèse concomitante à une diminution intracellulaire des niveaux de zinc suite à une exposition au manèbe ou au MnCl2. Enfin, une co-exposition avec du chlorure de zinc (ZnCl2) a partiellement restauré les niveaux intracellulaires/mitochondriaux de manganèse et prévient la toxicité induite par les Mn-EBDC. Dans une seconde étude, nous avons utilisé un modèle de stéatose des cellules HepaRG induite par les acides oléique et stéarique et démontré que l'exposition chronique au mélange pesticide, Mn-EBDC ou MnCl2 aggravait la stéatose induite par ces acides gras (AG) en l'absence de cytotoxicité. Le mécanisme impliquait une absorption accrue de AG et l'inhibition de la sécrétion de VLDL. De plus, nous avons constaté que l'exposition à des concentrations non cytotoxiques du mélange de pesticides ou de MnCl2 (≤ADI/10) réduisait fortement l'expression et les activités enzymatiques des CYP2E1, CYP3A4 ou CYP2B6. Fait intéressant, ces inhibitions étaient associées à une réduction de l'expression des régulateurs transcriptionnels PXR et CAR des CYP. Les altérations des expressions et des activités des enzymes de phase I par le mélange de pesticides réduisaient le catabolisme du diazinon. L’ensemble de ces résultats a démontré que les expositions aux dithiocarbamates et au MnCl2 produisent des effets cytotoxiques et altèrent les métabolismes des lipides et des xénobiotiques dans les hépatocytes humains in vitro.
|
|
Physiologie, physiopathologie, biologie systémique médicale
/ 13-09-2019
Peyronnet Benoit
Voir le résumé
Voir le résumé
Objectifs : Décrire les spécificités des troubles vésico-sphinctériens des patients spina bifida, leur impact sur la mortalité et l’intérêt d’outils diagnostiques alternatifs à l’urodynamique pour l’évaluation du régime de pression vésicale dans cette population. Méthodes : une cohorte prospective a été utilisée pour décrire les troubles vésico-sphinctériens des patients spina bifida et une étude épidémiologique nationale sur la base PMSI a été effectuée pour évaluer l’implication des causes urologiques sur la mortalité de cette population. Une étude prospective a été menée pour évaluer le rôle des marqueurs urinaires et de la radiomique dans l’évaluation du régime de pression vésicale chez les patients spina bifida. Résultats: Les troubles vésico-sphinctériens se caractérisent par la forte prévalence de troubles de la compliance et haut régime de pression vésicale. Les pathologies urologiques sont ainsi la première cause de mortalité des patients spina bifida en France. Le TIMP 2 et le MMP-2 urinaire ont associés à l’hypocompliance vésicale et le TIMP 2 urinaire a des performances diagnostiques légèrement supérieure aux paramètres urodynamiques pour l’atteinte du haut appareil urinaire. Le profil des marqueurs urinaires em cas d’hyperactivité détrusorienne diffèrent entre les spina bifida et les autres pathologies neurologiques en particulier pour les marqueurs de remodelage de la matrice extracellulaire tel le TGFβ-1. La radiomique, en particulier l’analyse de texture scanner est associé à certains paramètres urodynamiques et pourrait permettre l’évaluation du régime de pression vésicale chez les patients spina bifida. Conclusion: Les patients spina bifida présentent des troubles vésico-sphinctériens singuliers et sévères dont le remodelage de la matrice extracellulaire semble être un déterminant physiopathologique important. Un évaluation multimodale du régime de pression vésicale incluant les biomarqueurs urinaires et la radiomique pourrait permettre d’optimiser la prise en charge.
|
|
Nutrition et pathologies métaboliques
/ 28-10-2022
Robin François
Voir le résumé
Voir le résumé
L’ostéoporose représente un problème de santé publique, particulièrement par l’intermédiaire de ses conséquences en termes de morbi-mortalité. La complication principale de cette maladie est la fracture, occasionnant un surrisque de décès et d’institutionnalisation. La surcharge en fer est une cause bien identifiée d’ostéoporose secondaire. L’intérêt pour cette cause secondaire de perte osseuse est renforcé par le fait que l’augmentation de la ferritinémie chez les femmes ménopausées serait associée à un excès de fragilité osseuse. Les mécanismes cellulaires et moléculaires impliqués dans l'ostéoporose liée au fer ne sont pas entièrement compris. Ceux-ci aboutissent à un déséquilibre de l’homéostasie osseuse, avec activation de la résorption et diminution de la formation osseuse. Notre objectif était d'étudier les rôles respectifs du fer lui-même, mais aussi de l’hepcidine, acteur central de la régulation du niveau de fer plasmatique, et des autres métaux interagissant avec le métabolisme du fer dans le développement de l'ostéoporose liée à la surcharge en fer. En s’appuyant sur des modèles murins de surcharge en fer génétique (Hfe-/-, Bmp6-/-) ou secondaire (fer dextran), puis des modèles cellulaires, nos résultats suggèrent que le fer à lui-seul ne peut pas expliquer l’ensemble du phénotype osseux, avec une perte osseuse retrouvée exclusivement dans les modèles de surcharge génétique. La diminution de l’hepcidine dans les modèles génétiques pourrait avoir un rôle dans la perte osseuse, qui semble apparaitre principalement par dépression ostéoblastique. Concernant les autres métaux, étudiés dans les mêmes modèles ainsi que chez l’humain, les observations montrent une différence de la concentration sérique des métaux entre les sexes avec des différences notables entre homme et femme, notamment concernant l’aluminium et le cadmium. L’ensemble de ce travail permet donc de préciser le mécanisme de la perte osseuse dans le cadre des surcharges en fer, avec potentiellement des applications pouvant s’étendre à la population générale, avec identification de groupes à risque.
|
|
Biologie moléculaire et structurale, biochimie
/ 15-07-2020
Saba Saad
Voir le résumé
Voir le résumé
Le poly(acide malique) et ses dérivés sont des polymères aux propriétés de biocompatibilité et de bio(dégradabilité) remarquables, qui en font des candidats de choix pour l'élaboration de systèmes de vectorisation de principes actifs. Une première partie de ce doctorat a été consacrée à l’évaluation de la biocompatibilité et de la captation de nanoparticules (NPs) fluorescentes formées à partir de poly(malate de benzyle) (PMLABe) obtenus par polymérisation soit chimique soit enzymatique du malolactonate de benzyle par des cellules hépatiques HepaRG et des macrophages humains primaires. . Toutes les NPs sont peu toxiques, mais les niveaux de captation par les cellules HepaRG et les macrophages varient considérablement en fonction des caractéristiques physico-chimiques des NPs. Un second objectif était d’évaluer l’influence du taux de PEGylation de NPs à base de PMLABe et de PEG-b-PMLABe sur leur captation cellulaire. Enfin, nous avons évalué la biocompatibilité et la captation de NPs à base de dérivés hydrophobes et amphiphiles du poly(acide diméthylmalique) : les niveaux de toxicité et d’internalisation semblent être relatifs aux caractéristiques physico-chimiques des NPs.
|
|
Physiologie, physiopathologie, biologie systémique médicale
/ 13-12-2021
Verres Yann
Voir le résumé
Voir le résumé
L’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) et la bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO) sont deux pathologies pulmonaires graves dans lesquelles les productions accrues de cytokines pro-inflammatoires et de chimiokines contribuent au développement de l’inflammation au niveau pulmonaire et à la progression de la maladie. Ne disposant à ce jour d’aucun traitement curatif, il est essentiel de chercher à mieux comprendre les mécanismes de ces pathologies dans l’espoir d’identifier de potentielles nouvelles cibles thérapeutiques. Dans ces travaux, nous avons pu confirmer l’implication de la voie de signalisation JAK/STAT dans la réponse inflammatoire et chimiotactique des macrophages humains exposés à de la fumée de cigarette et du LPS. De plus, l’utilisation d’inhibiteurs de cette voie a permis de modérer cette réponse inflammatoire sans excessivement affaiblir la capacité des macrophages à lutter contre les pathogènes, en faisant une cible thérapeutique prometteuse dans le traitement de la BPCO. Nous avons aussi pu évaluer les effets du facteur de croissance des nerfs (NGF) sur les monocytes humains non différenciés, ce qui nous a dans un premier temps amenés à soulever une problématique méthodologique concernant l’usage de l’albumine bovine comme protéine de transport pour le NGF, de par sa capacité à induire des réponses variées dans nos cellules. Nous avons ensuite pu mettre en évidence une potentielle capacité du NGF, s’il est associé à d’autres stimulus, à induire la production de cytokines pro-inflammatoires et de chimiokines par les monocytes humains non différenciés. Ces résultats soutiennent l’idée que le blocage de l’action du NGF puisse être bénéfique dans le traitement contre l’HTAP.
|
|