Université de Rennes 1 Optimisation de stratégies génétiques de remplacement de la nature des immunoglobulines produites par une cellule B Optimization of genetic strategies of replacement of the immunoglobulins produced by a B cell Thérapie cellulaireLymphocytes BImmunoglobulinesEdition génétiqueCRISPR Cell therapyB lymphocyteImmunoglobulinGenetic engineeringCRISPR Thérapeutique cellulaire Lymphocytes B Immunoglobulines CRISPR-Cas9 La thérapie cellulaire, exploitant le système immunitaire du patient, connaît un développement considérable pour le traitement de différents cancers. Les cellules CAR-T en sont le premier exemple, mais l’utilisation d’autres types cellulaires est aujourd’hui envisagée. Les lymphocytes B sont des cellules intéressantes pour leur capacité à établir une mémoire immune, mais aussi à sécréter des anticorps spécifiques lorsqu’ils se différencient en plasmocytes. Un modèle thérapeutique dans lequel les cellules B du patient seraient prélevées et modifiées génétiquement pour l’expression d’un anticorps spécifique puis réinjectées présenterait l’avantage majeur de pouvoir continuellement infuser des anticorps thérapeutiques dans l’organisme, mais aussi de générer des cellules B mémoires surveillant les rechutes. Ce travail présente la preuve de concept d’une telle thérapie, avec la mise au point de l’édition génétique par CRISPR-Cas9 des lymphocytes B qui sont des cellules difficiles à manipuler ex vivo. Pour cela, une structure originale d’immunoglobuline sous forme de simple chaîne a été utilisée, permettant de simplifier l’édition génétique tout en tirant profit de tous les mécanismes d’expression et de maturation des immunoglobulines propres aux cellules B, que ce soit l’hypermutation somatique ou la commutation de classe. La fonctionnalité d’une telle structure « scFull-Ig » a été validée sur les cibles HER2 et CD20, ainsi que son expression par les cellules B primaires. Cell therapy, using the patient’s own immune system, has hugely developed for the treatment of different cancers. CAR-T cells are the first example of such therapies, but other cell types can also be considered. B lymphocytes are interesting candidates, as they are able to establish an immune memory, but also to secrete large amounts of specific antibodies once differentiated into plasma cells. They could be used in a therapeutic scheme in which the patient’s B cells would be collected and genetically engineered to express a specific antibody then injected back into the organism. That would have the advantage to continuously infuse a therapeutic antibody into the patient’s body fluid and to generate memory B cells that can patrol for possible relapses. This work presents a proof of concept of such a therapy, by presenting the optimizations of the CRISPR-mediated genetic edition of B lymphocytes, which are difficult to manipulate ex vivo. To achieve this, an original format of a single-chain immunoglobulin was used, allowing an easier gene edition. The adopted strategy takes advantage of all endogenous mechanisms of B cells for the expression and maturation of immunoglobulins, such as somatic hypermutation or class switch recombination. The functionnality of such a structure, “scFull-Ig”, was validated against two targets, HER2 and CD20. Edited primary B cells effectively expressed the scFull-Ig. Electronic Thesis or DissertationText fren application/pdf1 : 20185 Kohttps://ged.univ-rennes1.fr/nuxeo/site/esupversions/62f51726-8bea-4852-86c4-bd8ac045e8c0 Ueda Natsuko 1995-06-22 XX 266049303 natsuko.u1@gmail.com 2022REN1B036 http://www.theses.fr/2022REN1B036 2022-07-04 Immunologie Universite de Rennes 1thesis.degree.grantor_1 02778715X Doctorat non ouiCognéMichelintervenant_1059176474VerhoeyenElsintervenant_2159656028FerrandChristopheintervenant_3123171822WatierHervéintervenant_406713470X Biologie-SantéecoleDoctorale_1 221707778 MOBIDICpartenaireRecherche_1 266285627 ddc:610 CognéMichelVerhoeyenElsFerrandChristopheWatierHervéUniversite de Rennes 1Sciences et technologie, medecine, pharmacie, odontologie, droit, economie, gestion, philosophieBiologie-SantéÉcole doctorale Biologie-Santé (Rennes)MOBIDIC ASCII PDF 20669513